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氨基酸測(cè)定儀的工作原理是什么?

更新時(shí)間:2023-10-14點(diǎn)擊次數(shù):563
  氨基酸測(cè)定儀是一種用于分析和測(cè)量樣品中氨基酸含量的儀器。其工作原理基于氨基酸的特性以及化學(xué)反應(yīng)原理。
 
  氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本組成單元,其分子結(jié)構(gòu)包含一個(gè)氨基基團(tuán)(NH2)和一個(gè)羧基(COOH),以及與中央碳原子連接的側(cè)鏈。氨基酸的種類很多,每種氨基酸的側(cè)鏈結(jié)構(gòu)各不相同,這決定了它們?cè)诨瘜W(xué)性質(zhì)上的差異。
 
  氨基酸測(cè)定儀主要基于以下兩種方法進(jìn)行氨基酸的測(cè)定:色譜法和光度法。
 
  1、色譜法:
 
  (1)樣品準(zhǔn)備:首先,將待測(cè)樣品進(jìn)行處理,通常需要將樣品中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化為氨基酸。這可以通過酸水解或酶催化反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)。
 
  (2)色譜分離:處理后的樣品被注入到氨基酸分析柱中,其中氨基酸分離根據(jù)不同的物理性質(zhì)進(jìn)行。常見的方法是離子交換色譜和高效液相色譜(HPLC)。在這些色譜柱中,氨基酸根據(jù)側(cè)鏈的性質(zhì)以不同速度通過,從而實(shí)現(xiàn)分離。
 
  (3)檢測(cè):分離出的氨基酸在檢測(cè)器中被定量檢測(cè)。常用的檢測(cè)方法有紫外光譜法(UV)和熒光檢測(cè)法。這些方法利用氨基酸結(jié)構(gòu)上特定的吸收或發(fā)射特性來確定其濃度。
 

氨基酸測(cè)定儀

 

  2、光度法:
 
  (1)反應(yīng)原理:常用的反應(yīng)是二氨基萘-2-磺酸(DNS)法。該方法基于氨基酸與DNS試劑之間的反應(yīng)。在堿性條件下,DNS試劑會(huì)與氨基酸中的羧基和氨基發(fā)生反應(yīng),生成帶有強(qiáng)吸收的產(chǎn)物。這種產(chǎn)物的濃度與樣品中的氨基酸含量成正比。
 
  (2)測(cè)定步驟:樣品先經(jīng)過蛋白質(zhì)水解處理,然后與DNS試劑混合,在高溫條件下進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)完成后,通過光度計(jì)測(cè)量產(chǎn)物的吸光度,并與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較,從而確定樣品中氨基酸的含量。
 
  總結(jié)起來,氨基酸測(cè)定儀的工作原理基于氨基酸的特性以及不同化學(xué)反應(yīng)的原理。通過有效的樣品處理、分離和檢測(cè)方法,可以準(zhǔn)確測(cè)量樣品中氨基酸的含量,從而對(duì)生化研究、食品分析、臨床診斷等領(lǐng)域提供重要的信息和數(shù)據(jù)。
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